低速离心机在中性粒细胞磁珠分选中的应用

      |      2019-11-20 10:56:46
        彩客网app试剂耗材及设备:磁力分选器,磁柱,cd15磁珠试剂盒,磁珠分选缓冲液50ml,rp1640,1ml枪及枪头,20微升枪与枪头,蜀科低速离心机,15ml离心管4支,细胞计数板。
步骤:
     1.制冰,保证磁力分选器可以放入冰盒内操作,在4-8℃内进行分选;
     2.配液磁珠分选缓冲液(50ml?pbs液中含2mmol/l?edta,0.5%bsa,ph=7.2);
     3.将上步初步分选的中性粒细胞悬液用蜀科低速离心机300g离心10分钟,去上清;

     4.细胞重悬于磁珠分选缓冲液中,107细胞重悬于80微升缓冲液中;(如细胞数多按倍数增加)
     5.107细胞中加入20微升cd15磁珠;充分混匀放入2-8℃避光孵育15分钟;
     6.用1-2ml缓冲液洗涤细胞/107细胞,再次用蜀科低速离心机300g离心10分钟,去上清;
     7.重悬细胞于缓冲液中,108细胞重悬于500微升缓冲液中;
     8.将磁力分选器置于冰盒中,用3ml缓冲液冲洗磁柱;
     9.将含有中性粒细胞的缓冲液加入磁柱中;

     10.用缓冲液冲洗磁柱,每次3ml,冲洗3次;
     11.除去磁场,把磁柱放置于15ml离心管上,用5ml缓冲液加压快速冲洗磁柱;
     12.离心管中收集的便是中性粒细胞;
     13.最后用蜀科低速离心机300g离心去上清,重悬细胞于10ml细胞培养液中,细胞计数。
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